Bob Amsberry est né à Boring, dans l'Oregon. Il a travaillé comme disc jockey pour la radio KEX à Portland pendant huit ans avant d'obtenir sa chance à la télévision presque par accident. Walt Disney l'a fait venir à Hollywood pour écrire des chansons pour The Mickey Mouse Club (1955). Il a si bien réussi que, lorsqu'il a fallu ajouter un autre artiste aux côtés de Jimmie Dodd et Roy Williams pour le segment des Mouseketeers, le poste a été proposé à Bob. En plus de jouer dans l'émission, il s'est occupé de certains effets sonores spéciaux et a endossé le maquillage et le costume de Bob-O, le clown de Disneyland. Il a rencontré sa femme Beverly à la station KEX et ils ont eu deux enfants, Kevin et Kelly. Beverly était chanteuse de blues et a remporté un concours sur Ted Mack & the Original Amateur Hour (1948).